عنوان اختراع: كيت تشخيص همزمان بيماري هاي ويروسي IPN, IHN و VHS در ماهي Multiplex PCR kit for simultaneous detection of IPN, IHN and VHS in fishes خلاصه اختراع: بيماري‌هاي ويروسي از جمله بيماريهاي ناشي از ويروس هاي IPNV (Infectious Pancreatic Necrosis Virus)، IHNV ((Infectious Hematopoietic Necrosis Virus و VHSV (Novirhabdovirus Viral Hemorrhagic Septicemia Virus) هر ساله خسارت فراواني به صنعت آبزي پروري وارد مي‌سازند لذا جهت جلوگيري از خسارت بيشتر به اين صنعت، لازم است تشخيص سريع و كم هزينه با حساسيت بالاي ويروس هاي مذكور در راس برنامه هاي مديريت بهداشت آبزيان قرار گيرد. در مطالعه حاضر تشخيص سريع اين پاتوژن¬ها با استفاده از كيت Multiplex PCR مورد بررسي قرار گرفت. ويروس هاي IPN، VHS و IHN تهيه شده و پس از خالص سازي در محيط كشت اختصاصي، كشت داده شده و استخراج RNA از محلول رويي كشت سلول آماده، با استفاده از كيت تجاري، مطابق دستورالعمل شركت سازنده انجام شد. توليد cDNA براي هر ويروس به روش Reverse transcriptase انجام شد. بهينه¬سازي تست RT-PCR جهت تشخيص سه ويروس و تست Multiplex PCR جهت تشخيص همزمان سه ويروس IPN، VHS و IHN انجام شد. در تست Multiplex PCR قطعات مورد نظر در ژنوم RNA ويروس¬هاي، IPN، VHS و IHN به صورت همزمان رونوشت برداري معكوس شده و تست PCR با مقادير متفاوت از جفت پرايمرهاي چندگانه براي هر ويروس انجام شد. الكتروفورز محصول PCR روي ژل آگارز ويروس هاي VHSV، IHNV و IPNV را بترتيب به صورت باندهايي به طول 625 bp، 371 bp و 206 bp آشكار ساخت. حساسيت اين تست با استفاده از رقت¬سازي در 10 لوله براي هر ويروس اندازه¬گيري شد كه بترتيب براي ويروس هاي IPN، IHN و VHS برابر با 100، 100 و 50/32% TCID50/ml تعيين گرديد، ضمن اينكه ويژگي تست برابر 7/93% بود. كيت تشخيص همزمان بيماري¬هاي ويروسي IPN, IHN وVHS در ماهي در مقياس آزمايشگاهي توليد گرديد.